角色的主要病毒衣壳蛋白的老鼠多瘤病毒VP1和稳定微管

病毒劫持细胞功能的许多方面为了访问宿主细胞的复制机器,并创建一个合适的环境,他们的成功复制。病毒的关键步骤之一是运输从细胞质内的细胞膜,细胞核。细胞内微管是必不可少的胞内运输过程包括细胞器,分泌囊泡,其他大分子组件。它也研究病毒还利用宿主细胞的微管交通系统。

的多瘤病毒家族是一组小无包膜双链DNA病毒,是肿瘤发生的。人类病原体的临床意义如BKPyV迄今已确定,JCPyV和默克尔细胞癌多瘤病毒(MCPyV),可能会影响免疫功能不全的人。老鼠多瘤病毒(MPyV)模型对这些病原体,dsDNA基因组编码6基因产物,三是早期抗原(大、中、小T)和三个结构蛋白(主要衣壳蛋白VP1,较小的衣壳蛋白,VP2、VP3)。早期抗原参与病毒转录和DNA复制和解除对宿主细胞发现了调解病毒复制。蛋白质衣壳与72衣壳粒二十面体结构。每个壳粒由排成五聚物VP1和VP2或VP3小蛋白质衣壳的内部。衣壳粒形成在细胞质中,然后复杂转入细胞核中,病毒粒子的组装。虽然衣壳蛋白VP1的交互是参与病毒基因组的条目和贩卖细胞核步骤,VP1如何与细胞结构,如微管相互作用尚不清楚。

助理教授的研究小组,Jitka Forstova,实验室负责人查尔斯大学的病毒学已经使用MPyV帮助澄清VP1和微管之间的相互作用。他们的研究表明,微管(包括有丝分裂纺锤体)和细胞伴护热休克蛋白90(一半)和其他组件与VP1交互。在后期阶段的感染,可以观察VP1与微管在细胞质中。

最近出版的病毒(2020),“主要衣壳蛋白VP1,鼠标多瘤病毒刺激微管稳定微管蛋白乙酰转移酶1”的活动,Forstova和他的同事们已经能够更深入地探讨这些交互。这包括微管,VP1的绑定和稳定的影响微管和微管蛋白的乙酰化αK40。此外,他们调查αK40乙酰化作用和角色扮演在MPyV感染。他们利用技术的结合——包括Immunoelectron显微镜、共焦和TIRF成像的荧光标记蛋白和微管,以及抑制化验原位细胞分离有效地确定这些复杂的相互作用。

图复制Lenka Hornikova et al . VP1保护从诺考达唑诱导微管解聚作用。WOP细胞转染质粒表达VP1和24 hpt细胞治疗与诺考达唑(4µM)表示。(A)在治疗后,可溶性微管蛋白被淘汰,细胞被固定,聚合的微管蛋白(浴缸;红色)和VP1(绿色)被特定的抗体染色。显示选中的共焦部分。扩大细胞在insets的细节。酒吧:10µm。

本研究有助于揭示之间的复杂的相互作用涉及VP1和微管MPyV感染。总结一下他们的发现:他们发现微管的数量被发现增加细胞表达VP1和VP1直接结合到微管,并提供一个稳定的效果。还发现刺激VP1 hyperacetylation微管和微管乙酰化作用被发现增加感染的后期阶段。有趣的是,乙酰化微管是病毒感染没有必要。

组蛋白脱乙酰酶6 (HDAC6)是一种蛋白质,广泛的功能。它有一个α-tubulin以及伴护蛋白脱乙酰酶的活动,它还具有一个泛素结合域在其糖基表示蛋白质的新陈代谢功能。虽然在这项研究中没有观察到HDAC6参与微管乙酰化作用,结果表明,HDAC6 MPyV感染的后期阶段。抑制HDAC6使用tubacin导致VP1和相应水平的提高能够抑制病毒生产的后代。HDAC6的角色不一定是直接与微管乙酰化作用,但鉴于HDAC6可能行为的广泛的功能通过另一个抑制或激活过程。进一步的研究无疑将有助于我们理解VP1和微管之间复杂的相互作用,并可能导致可能的抗病毒的目标和策略多瘤病毒群病毒。

TIRF成像设置

共焦和TIRF成像他们用尼康,Ti-E Eclipse显微镜60或100××1.49 n.a油浸客观(尼康,计划7月iXon超888 EMCCD相机切换561 nm和488 nm激光和相应的滤波器组的成像Rhodamine-labeled微管和EGFP-labeled蛋白质。收购率要求每10秒一帧,使用流细胞。这个配置使用一个iXon超888 EMCCD相机是非常适合这些研究从荧光标记的蛋白质往往自信号很弱,需要最敏感的探测器。找出更多关于病毒学研究iXon相机在我们解决方案请注意。

研究论文:https://www.mdpi.com/1999-4915/12/2/227/htm

实验室:实验室的病毒学、遗传学和微生物学系大学理学院,查尔斯

病毒学实验室是遗传学和微生物学的一部分,在查尔斯大学理学院。实验室的一个主要的研究领域是生物学的小无包膜DNA病毒,如鼠标多瘤病毒类型的物种多瘤病毒家庭,在本文中被描述。的一部分,他们的工作是生产polyomavirus-based纳米颗粒(病毒样颗粒,一种)基础病毒学研究以及治疗和诊断的目的。一种是特别有趣,因为他们可以用于许多方面,如潜在的疫苗,也有效地转移外源基因信息到特定的靶细胞。实验室还积极从事疫苗研发对猪圆环病毒和牛乳头状瘤病毒。

找到更多关于病毒学的研究实验室,遗传学和微生物学系,理学院,查尔斯大学,捷克共和国:https://www.natur.cuni.cz/biology/genetics/veda-a-vyzkum-1/laboratory-of-virology/laborator-virologie-en

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