如何使用共焦显微镜图像病毒?

挑战的背景

病毒对人类健康构成严重威胁;他们负责各种疾病和被发现在整个环境。了解病毒引起感染,宿主相互作用和适应性发展有效的抗病毒治疗是至关重要的。光学显微镜对于成像方法可以非常有用病毒和相关的细胞过程,从而导致更好的理解病毒感染和管理策略。

成像的病毒提出了几个实验挑战,小尺寸的重要挑战之一。通常情况下,单独的病毒粒子,或病毒颗粒,直径小于220纳米(纳米),这是在光的衍射极限。先进的成像方法因此需要绕过这个限制。(如使用先进的成像方法。超分辨率显微术像病毒一样)对象,小于220纳米,可以准确地得到解决。不过,当成像活跃病毒,其他要求挑战困难等标签病毒包围组件、光毒性宿主细胞,光漂白,也需要解决。最后,但并非最不重要的是,病毒感染过程可以发生在分钟张成的空间需要收购多个图像(高时间分辨率)捕获的所有事件的感染。

技术解决方案

时不时共焦显微镜病毒粒子成像是一个理想的解决方案以及捕捉live-cell病毒-宿主感染事件。

旋转磁盘共焦技术提供温和(live-cell兼容)高分辨率图像在不影响细胞的生存能力。

速度和灵敏度,由于感染事件的时间(几分钟),需要收集大量的图像捕获所有感染的步骤。的信号标记病毒是很低的,但是光漂白的样本或宿主细胞必须避免光毒性。基于成像探测器也因此需要提供必要的敏感性在高速度。

决议- - - - - -所需的分辨率图像病毒l在XY 50 - 200纳米的范围。光的衍射极限显微镜约220海里;因此,技术可以克服衍射极限,即超分辨率技术是必需的。

活细胞优化超分辨率- - - - - -超分辨率技术,克服光的衍射极限显微镜通常需要采集大量的帧(1000年至10000年的顺序图像)和/或成像与极高的光强度。在大多数情况下,样品制备也复杂,也有特定的荧光团的要求。这些需求呈现大多数现有的超分辨率技术不兼容live-cell成像。此外,使用特定的超分辨率荧光团可能改变宿主细胞的正常活动病毒。

和或成像解决方案的病毒

的和或蜻蜓时不时共焦平台是完整的和研究的理想解决方案病毒由于速度的完美结合,灵敏度和分辨率。病毒囊膜组件的成像是可行的蜻蜓加上和或´s高灵敏度相机,等黑色背景Sona sCMOS或iXon EMCCD系列。蜻蜓允许成像技术等共焦旋转的磁盘,TIRF,和dSTORM。这些成像模式都交付在一个单一的系统,允许用户为每个特定的应用程序选择最佳匹配。

进一步的好处是任何可以结合影像学特征live-cell兼容的超分辨率技术”SRRF”(超分辨率径向波动)。不像其他的超分辨率技术,SRRF兼容活细胞,提供高速super-resolved实时成像的优势。118bet.net金博宝app (和或基于gpu的,优化的实现SRRF)是可用的蜻蜓并允许super-resolved图像的采集。此外,SRRF-Stream全世界都兼容使用任何用于标签病毒荧光团。

最后,伊万里瓷器提供了一个健壮的包的分析解决方案适应所有领域的生命科学包括3 d分析、可视化、分割和渲染工具。188博金宝网页官网入口能够处理大型数据集,伊万里瓷器是理想的长期分析,病毒学成像研究。

图1 -丝形成病毒感染细胞的分析。图呈现的图像维罗(A)和固定Huh7 (B)细胞感染裂谷热病毒。图像得到使用和或蜻蜓。感染和灯丝的形成进行了分析通过免疫荧光显微镜使用anti-NP(绿色)或anti-NSs抗体(红色)。核与DAPI染色(蓝色)。酒吧= 10μm规模;NP =核衣壳蛋白;NS =裂谷热病毒的主要毒力因子。(参考:Shufen, l . et al ., 2019 -病毒。)