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如何克服挑战的成像泡贩卖吗

挑战的背景

细胞外和细胞内囊泡执行至关重要的功能在国米/胞内沟通。毫不奇怪,放松管制的内吞作用的途径影响多种疾病,如癌症、糖尿病、心血管疾病等。此外,内吞作用的途径也可以用作治疗分子提供一个有价值的工具。因此,深入了解泡贩卖,内吞作用的通路是极端重要的促进疾病的深入了解,和新疗法的发展。

然而,有效地成像泡贩运是一个艰巨的任务,和研究人员需要克服一些挑战能够这样做。泡成像关键挑战是避免光毒性、光漂白以及要求快速采集速度和高成像分辨率(固定细胞或住成像分析)。这些挑战不以获取图像;收购后泡跟踪分析也是一个要求高的任务。这里我们将关注泡贩卖成像速度和分辨率要求。

图1:mCherry-C2βf -肌动蛋白在细胞的膜片而GFP-C2αcolocalizes f -肌动蛋白全心全意

技术解决方案

基于摄像头的共焦系统是一个更好的解决方案为生活泡细胞生存能力由于成像不妥协光毒性。设备需要获取速度快和高分辨率成像。

  • 速度——同时可视化不同的泡走私事件需要一个工具,可以获得多个通道,由于事件性质的快速,显微镜需要获得以非常快的速度。
  • 决议,该决议要求可视化泡贩卖在50 - 100 nm窗口在XY。光的衍射极限显微镜约200海里;因此,图像泡贩卖,技术,打破衍射极限,超分辨率技术是必需的。
  • 活细胞超分辨率——超分辨率技术超越衍射极限的光学显微镜通常需要收购大量的帧(10的顺序3到104图像)和/或高的成像光线强度。在大多数情况下,样品制备是复杂的,有特定的荧光团的要求。所有这些需求呈现大多数现有的超分辨率技术不兼容live-cell成像。

和或泡成像的解决方案

蜻蜓是图像细胞间交易的完整的解决方案,因为它的速度、灵敏度和分辨率。高度敏感的相机允许非常微弱的信号检测具有高量子效率。超高速低光成像和蜻蜓是可能的和或´s相机等黑色背景SonaiXon EMCCD系列。成像技术,如共焦旋转磁盘,风暴超分辨率(分辨率~ 20 nm)或TIRF(分辨率~ 50 nm)所有可能的蜻蜓,每个泡研究这些成像模式的优势。重要的是任何形态都可以结合超分辨率技术SRRF(超分辨率径向波动)。118bet.net金博宝app 兼容live-cell成像提供非常快的优势super-resolved住成像。

关键需求 泡成像解决方案:蜻蜓和Andor´s高量化宽松相机
超高速采集速度 蜻蜓的EMCCD和sCMOS探测器允许光成像和高采集速度很低。蜻蜓是至少十倍点扫描共焦系统。内部束器允许蜻蜓收购两个渠道同时在两个独立的探测器(相机)。结果1 -检测超快的事件与收购加速到400帧每秒。结果2 -检测两个独立通道同时不影响速度或决议。
获取图像分辨率为50 - 100纳米 支持dSTORM蜻蜓。蜻蜓提供双重色彩同时TIRF同样的穿透深度。详细的空间信息是可能的。结果1 -分辨率的增加与dSTORM 20海里。结果2 -轴向分辨率为100 nm与TIRF可能增加和高对比度。结果3 -打破衍射极限,同时获得两个独立通道。
获得生活Super-resolved图像(分辨率< 200海里) 和或´s相机提供了一个集成牌照SRRF(超分辨率径向波动)。SRRF使用荧光体排放的波动及其插值增加光学系统的有效决议。和或内置的SRRF流算法允许实时SRRF立即计算和可视化的分辨率提高。此外,SRRF兼容传统的荧光团,不需要复杂的样品准备。SRRF兼容共焦,TIRF和宽视野成像,也兼容深度成像。结果1 -SRRF-stream收益率之间的分辨率增加2 - 3年来(50 - 150 nm最终解决)和最后的数据。结果2 -由于其低功率需求(mW / cm2 W / cm2范围),SRRF-stream兼容live-cell成像。结果3 -SRRF-stream算法允许收购活细胞图像打破衍射极限在10帧每秒的帧速率。

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